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植物ELISA试剂盒操作流程

发布时间:2019/7/19 10:05:35      阅读次数:68

  1 待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。

  2 酶标板置4℃,包被过夜.

  3 洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动.甩去孔内液体后在吸水纸上拍干.重复洗涤3-4次.

  4 阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。

  5 酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min.

  6 洗板,同(4).

  7 每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。

  8 酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。

  9 洗板,同(4).

  10 每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。

  11 每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应.

  12 分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,zui终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰.

  13 数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值.S/N≥2.1为阳性判定标准.

 

 

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