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ELISA试剂盒的应用原理

发布时间:2019/10/12 14:16:25      阅读次数:54

 

在ELISA试剂盒的实际应用中,经过不同的设计,有许多具体的方法和步骤,如双抗体夹心法 间接法 竞争性法 双部位一步法 捕捉法检测IgM抗体 应用亲和素和生物素ELISA等.在今天的技术内容中,上海恒远生物公司详细阐述了ELISA方法设计的原则.

 

ELISA试剂盒是以免疫反应为基础,将抗原和抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用结合起来的一种高度灵敏的检测技术.由于抗原和抗体的反应是在聚苯乙烯微滴定板的孔内进行的,所以添加的每一种试剂都可以通过洗涤去除多余的游离反应物,从而保证检测结果的特异性和稳定性.

 

用双抗体夹心法测定样品水平,用微孔板包覆纯化抗体制成固相抗体,将固相抗体依次添加到单克隆抗体包被的微孔中,再与HRP标记的抗体结合形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,彻底洗涤后加入底物TMB进行抗体开发.

 

在HRP酶催化下将ELISA试剂盒TMB转化为蓝色,在酸性作用下转化为Zui终黄色,颜色深度与样品呈显著正相关,酶标仪在450 nm波长处测定吸光度(OD值),用标准曲线计算样品浓度.

 

 

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